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jueves, 29 de diciembre de 2011

Micosis pulmonares y de sacos aéreos: también son micotoxicosis.

Por: Bernardo Mejía Arango. M.V.Z. M.Sc.
Fotografías: Bernardo Mejía Arango. Fotografías protegidas por derecho de autor. Cualquier copia o utilización requiere autorización previa.
Imagen No. 1  Granulomas  de origen micótico en cavidad toracoabdominal. Ave de 1 semana de edad.

Casi siempre hemos  considerado al Aspergillus como un patógeno que requiere de un estado previo de inmunodepresión, para invadir tejidos. Lo que  casi nunca tenemos en cuenta es que el Aspergillus tiene sus propios mecanismos para lesionar los tejidos  y  sus propios mecanismos para facilitar la invasión de un organismo.

A la emisión de diagnósticos de laboratorio indicando el hallazgo de micosis pulmonares y/o de sacos aéreos (neumonía crónica granulomatosa, aerosaculitis granulomatosa ó micótica), no se  les ha dado la importancia que merecen.

El hallazgo de lesiones  en sacos aéreos y/o pulmón que implique la presencia de hongos, aunque necesariamente están reflejando  contaminaciones en medio ambiente (Incubadora, cama, alimento) merecen atención especial por las implicaciones que tienen debido a que la proliferación de hongos en vías aéreas   muchas veces facilita el ingreso de otros agentes patógenos, entre ellos las bacterias y entre las bacterias la Escherichia coli y los Mycoplasmas.

La primera descripción de un cuadro patológico pulmonar provocado por Aspergillus en aves la hicieron Meyer y Emmert en 1815. Solo hasta 1850 se cultivó el hongo de lesiones pulmonares y se identificó como Aspergillus fumigatus. Las publicaciones de neumomicosis en humanos  comenzaron a  partir de 1847. Desde entonces se han descrito más de 200 especies de Aspergillus, más  o menos 20 de las cuales han sido asociadas a cuadros patológicos en humanos y animales.

Aunque no  figuran muchas publicaciones relacionadas con el papel que juega la gliotoxina, un metabolito del Aspergillus fumigatus, en los cuadros clinicopatológicos de Aspergilosis en aves, existen estudios llevados a cabo en mamíferos incluyendo al hombre, sobre el papel  que juega  la gliotoxina en  las micosis pulmonares y sistémicas.
Con frecuencia las imágenes histopatológicas de micosis pulmonares en aves de diferentes edades  pero principalmente en aves jóvenes, muestran  la colonización de hongos comenzando por las vías respiratorias intrapulmonares, incluyendo los bronquios, parabronquios, atrios e infundíbulos.
Imagen No. 5. Granuloma en el lumen y sobre la pared de parabronquio. Corresponde a cortes efectuados en el pulmón de la imágen No. 1Coloración con hemamtoxilina-Eosina 40X
Es en estas estructuras a donde llegan las conidias de los hongos, especialmente Aspergillus, que  se inicia una serie de eventos y de liberación de compuestos químicos al medio que rodea tales conidias. La gliotoxina es solo uno de los varios metabolitos producidos por Aspergillus para favorecer la colonización en las diferentes vías respiratorias.
Aunque la capacidad del Aspergillus fumigatus para la producción de gliotoxina ha recibo atención en los últimos años, de pronto no ha habido la suficiente difusión de los hallazgos. La gliotoxina ha demostrado una potente actividad inmunodepresora in vitro ya que inhibe la adherencia de macrófagos pulmonares y peritoneales a superficies plásticas y puede producir apoptosis de los macrófagos y algunas otras células de la línea hematopoyética.

Comencemos diciendo que las conidias de Aspergillus liberan ciertas toxinas que inhiben el movimiento ciliar. Se ha demostrado que la gliotoxina disminuye el movimiento de las cilias y produce lesiones en el epitelio de la mucosa.

Igualmente produce adhesinas capaces de unirse al fibrinógeno, a la laminina, al complemento, a la fibroconectina, a la albúmina, a las inmunoglobulinas, al colágeno y a las proteínas de la sustancia surfactante.
No todas estas moléculas se encuentran en la superficie del epitelio respiratorio, de manera que las conidias de Aspergillus fumigatus son capaces de secretar enzimas que provocan daño tisular, tales como proteinasas y ribonucleotoxina, y un consiguiente aumento de fibrinógeno y laminina.

Imagen No. 2  Granuloma micótico en saco aéreo. Ave de  30 días de edad. Reacción inflamatoria periférica (Aerosaculitis)
Imagen No. 3  Estructuras micóticas tisulares (Hifas). Ocasionalmente se aprecian con coloraciones normales. Coloración con Hemamtoxilina-Eosina 100X
Imagen No. 4  Estructuras micóticas tisulares (Hifas). Se utilizan las coloraciones especiales cuando se observan los granulomas y no se observan las estructuras con coloraciones normales. Coloración de Gomori 100X
Aunque estos compuestos son importantes en la patogénesis de las micosis de  vías aéreas, tal vez la que mayormente facilita la entrada de las formas reproductivas del hongo en los tejidos es la gliotoxina; esta micotoxina es capaz de inhibir la fagocitosis de las conidias por los macrófagos y puede inducir  en ellos, mecanismo de apoptosis (Muerte celular  programada). Las conidias internalizan los tejidos sobre los cuales se depositan. Conidias procedentes de colonias mutantes de Aspergillus se unen a factores del complemento, opsonizándose de esta manera, es decir haciéndose reconocibles en términos de inmunogenicidad.
De esta manera, las conidias  que han logrado burlar el sistema inmunológico, germinan y el hongo comienza a invadir el tejido. En este momento de la respuesta, los heterófilos entran a jugar un papel importante en la defensa del organismo contra las estructuras reproductivas de los hongos. Es quizá por eso que los granulomas que se diagnostican en los estudios histopatológicos de micosis de vías aéreas, son piogranulomas (Tienen un componente purulento) y no puramente  granulomas.
Una vez anidado en cualquier parte del pulmón, el hongo comienza a  atacar las proteínas estructurales del mismo, mediante  dos enzimas: elastasas y  colagenasas

Desde el tejido pulmonar, las hifas del hongo pueden atravesar las paredes de los vasos y diseminarse a otras partes del organismo. La condición de  micosis sistémicas de acuerdo con mi experiencia no es muy frecuente, pero he encontrado casos de aves con síntomas nerviosos debidos a micosis del sistema nervioso central;  he observado evidencia de  granulomas  con formas  reproductivas de hongos atravesando las paredes de vasos e inclusive he observado granulomas intravasculares formando verdaderos trombos.  

Imagen No. 6.  Trombo granulomatoso/micótico adherido a la íntima de una arteriola pulmonar. La imagen corresponde a un corte histológico del pulmón que figura enla imagen No. 1 Coloración con
Hematoxilina-Eosina 40X

Los investigadores en el tema se refieren principalmente a la actividad elastasa de Aspergillus, refiriéndose a la capacidad de ataque  de  importantes componentes pulmonares. Los componente  descritos por los investigadores del tema incluyen
-     Serin-proteasa alcalina.
-     Metaloproteasa (Aspergilopepsina F): hidroliza  elastina, colágeno (Matrices protéicasdel pulmón) y laminina (Principal componente de la lámina  basal pulmonar), todos importantes componentes pulmonares.
-     Quimiotripsinas: degradan compuestos como elastina, fibrinógeno, colágeno y laminina.
-     Mitogilina: tiene actividad citotóxica.
-     Factores cilioinhibidores; uno bien identificado: la gliotoxina. Otro no bien identificado.
-     Factores de adherencia del Aspergillus sobre el fibrinógeno de los tejidos lesionados.

La gliotoxina no se presenta en todas las cepas de Aspergillus fumigatus. De hecho, las cepas de Aspergillus fumigatus se han clasificado, con relación a la producción de gliotoxina, en tres categorías: a) productoras de gliotoxina, b) No productoras de gliotoxina y c) productoras de compuestos similares a la gliotoxina. Además de inhibir la  función de macrófagos, inhibe la acción de neutrófilos (Cuyo equivalente en aves son los heterófilos), e inhibe la  función delas células T.

Encontrar en la necropsia de aves lesiones de  carácter micótico en pulmones y/o sacos aéreos tiene las siguientes implicaciones:

-   Que el hongo está creciendo en el tejido y que está sintetizando y liberando al medio  compuestos químicos  que favorecen a su vez la continuidad en el crecimiento del hongo.
-  Que la síntesis y liberación de compuestos químicos como la gliotoxina, están favoreciendo la invasión de agentes  patógenos en una lista de infecciones secundarias  o posteriores a la micosis misma: virus y bacterias.
-    Que muy probablemente las aves vienen de ambientes ricos en hongos.
-    Que eventualmente el ave  puede tener algún tipo de inmunodepresión, aunque esto no es completamente cierto. He visto casos de aves con granulomas micóticos en pulmón y/o en sacos aéreos, sin evidencia de inmunodepresión, comenzando porque el aspecto histológico de  bolsa de Fabricio, timo y bazo, es normal.

Con base en lo anterior, es que casi nunca encontramos las  infecciones con hongos, sobretodo en sacos aéreos, solas. Casi siempre  van acompañadas de otras infecciones como la producida por la Escherichia  coli, por lo menos es la que casi siempre  apreciamos a simple  vista de conformidad con sus características morfológicas.

Existen varias revisiones sobre la patogenicidad de Aspergillus, pero una de las más completas la realizó Jesús caballero del Toro quien presentó en 2005 un trabajo denominado “Un nuevo modelo de Aspergilosis pulmonar en rata, estudio comparativo y  aplicaciones al diagnóstico”, como parte de su tesis doctoral en la Universidad Complutense de Madrid.

En la Revista Iberoamericana de Micología (1988, Vol. 15:10-15), ya en 1988 se había hecho una publicación sobre las sustancias implicadas en la patogenicidad de Aspergillus.

Una revisión muy completa sobre el “Estudio de inmunomodulación de la respuesta inflamatoria mediante compuestos que regulan la adhesión y migración celular y el daño vascular” fue hecho por la doctora María Teresa Pozo Hernández, de la universidad Autónoma de Madrid, en  2002.

Es probable que haya estudios específicos en aves, pero considero que como micotoxina que es, no se está cuantificando. De la misma manera, no estamos dándole la importancia  que tiene el diagnóstico y el control de hongos en los sistemas productivos aviares.


Laringotraqueitis viral aviar I. Diagnóstico histopatológico. Importancia del número y tipo de muestras.

Por: Bernardo Mejía Arango. M.V.Z.  M.Sc. Fotografías:  Bernardo Mejía Arango. Protegidas por derechos de autor. Cualquier reproducción o 
                    utilización requiere autorización previa.

Para 1966, de acuerdo con los síntomas y las lesiones macroscópicas, ya se tenía sospecha de la presencia de la laringotraqueitis viral en Colombia, específicamente en el Valle del Cauca,  a donde probablemente se introdujo mediante  la práctica de vacunación a virus vivo en cloaca en aves en la zona de El Carmen, corregimiento del municipio de Dagua, en el Departamento del Valle del Cauca, suroccidente colombiano.


Imagen No. 1.  Laringotraqueitis viral. La secuencia fotográfica muestra una  célula  sincitial lista para desprenderse del epitelio de la mucosa de un corte de bronquio; en la fotografía de la derecha se aprecia el sincitio conteniendo cuerpos intranucleares de inclusión (Flechas) (Hematoxilina-Eosina 10X, 40X y 100X respectivamente).

El caso corresponde a  una granja de pollo de engorde de 40 días de edad. En la granja había 88.940 pollos de los cuales enfermaron 11.979 con blefaroconjuntivitis (En las aves afectadas, el ojo adquirió la forma "achinada" o de "ojo almendrado"). La muestra enviada al laboratorio de diagnóstico fueron 5 aves; se encontraron  sincitios conteniendo cuerpos intranucleares de inclusión en: tráquea: laringe: 4/5; bronquios: 2/5. No se encontraron cuerpos intranucleares de inclusión en tráquea.

La hipótesis a desarrollar en este artículo, es que es importante remitir para evaluación histopatológica en los casos en que se sospeche laringotraqueitis viral:  párpado, tráquea, laringe y tejido pulmonar que contenga bronquios. En este caso, si  se  hubiesen enviado solo tráquea, el resultado hubiese sido negativo, cuando en realidad no lo es. 
Alberto Orrego, Luis Abel Buitrago y Humberto Sardi, Médicos Veterinarios y funcionarios del Instituto Colombiano Agropecuario ICA en el Valle del Cauca, habían hecho una publicación denominada “Epidemiología de la Laringotraqueitis  aviar en el Valle del Cauca”. De acuerdo con el trabajo enviado en aquel entonces a la División de Sanidad Animal del Instituto Colombiano Agropecuario ICA, en junio de 1967 se hizo el primer diagnóstico histopatológico de laringotraqueitis viral aviar  en Colombia, en el Valle del Cauca en Cali (Muestras procedentes del corregimiento de La Buitrera). En 1970 se diagnosticó por histopatología en el municipio de Dagua igualmente en el Valle del Cauca. En noviembre de 1971 se diagnosticó en Armenia (Departamento del Quindío, Colombia)


Imagen No. 2  Laringotraqueitis viral. Cuerpos de inclusión intranucleares del virus de laringotraqueitis viral contenidos en células sincitiales. En la fotografía de la izquierda se observan en una célula sincitial la cual aún no se ha desprendidio del epitelio de la tráquea. En la fotografía de la derecha, la célula sincitial está suelta y contenida en el exudado  purulento en el lumen de la tráquea (Hematoxilina-Eosina 40X)

Las fotografías corresponden  a órganos de pollos de engorde de 35 días de edad de una granja de 77.000 aves de las cuales enfermaron 19.000 y habían muerto 518 hasta el momento en que  se tomó la decisión de recurrir al laboratorio para obtener un diagnóstico. En este caso se encontraron en la evaluación histopatológica, sincitios conteniendo cuerpos de inclusión en: tráquea: 2/5; laringe: 4/5 y párpado: 5/5
En el Congreso Nacional de Medicina Veterinaria y Zootecnia de Colombia celebrado en  Cúcuta, (Santander, Colombia), en 1971,  se presentó oficialmente un trabajo sobre laringotraqueitis viral en cuyo resumen dice, en forma imprecisa, que “Se comprobó definitivamente y por primera vez la existencia de la laringotraqueitis viral en Colombia”, el trabajo se refería al aislamiento del virus en membrana corioalantoidea de huevos embrionados y luego el enfrentamiento de los aislados con antisueros estándar y después la reproducción de la enfermedad mediante inóculos del virus aislado en aves mantenidas en unidades de aislamiento. El reporte figura en un compendio de los resúmenes presentados en el Congreso, en las páginas 42 a 43. 

No era pues el primer reporte en 1971. El primer reporte mediante análisis histopatológico se hizo como se dijo antes, en junio de 1967; el primer diagnóstico y el  primer reporte a las autoridades sanitarias, así no se haya publicado.


Imagen No. 3 Laringotraqueitis viral.  Cuerpos de inclusión de laringotraqueitis viral contenidos en células sincitiales intraepiteliales en la laringe. En muchos casos de infección con el virus de la laringotraqueitis viral, cuando resulta comprometido el epitelio laríngeo, es fácil encontrar estas células sincitiales conteniendo cuerpos intranucleares de inclusión dentro del epitelio, en la transición del epitelio estratificado plano al epitelio respiratorio. La fotografía corresponde a un caso  de pollo de engorde de 24 días de edad, de una granja con 43.248 aves de las cuales enfermaron 16.320 y en el momento de la remisión de aves al laboratorio de diagnóstico habían muerto 204. Se encontraron células sincitiales conteniendo cuerpos intranucleares de inclusión en 1/5 cortes de tráquea y 5/5 cortes de párpado. Este caso es uno de los denominados forma conjuntival o palpebral de la laringotraqueitis.
La verdad es que la laringotraqueitis  viral aviar se venía diagnosticando desde años atrás mediante histopatología y los  reportes de los diagnósticos probablemente se quedaron en los informes a la División de Sanidad Animal del ICA. Así lo demuestra el trabajo presentado por Orrego, Buitrago y Sardi.
En 1973 hubo un brote en 8 granjas en al área del municipio de Cali (Colombia, Departamento del Valle del Cauca), y en 1975 se comprobaron oficialmente dos brotes en los municipio de Candelaria y Pradera, igualmente en el Valle del Cauca.
Así que la  enfermedad  que había llegado alrededor de dos década atrás,   llegó para quedarse, es decir se  hizo enzoótica en el Valle del Cauca, y se distribuyó a otras áreas de Colombia.
Estas dos publicaciones,  se fundamentaron en diferentes técnicas y metodologías de laboratorio, metodologías y técnicas  cuyo número se ha visto engrosado por el advenimiento de otras nuevas basadas en  la evolución de los procesos de laboratorio, entre ellas las técnicas inmunodiagnósticas (ELISA por ejemplo) y las técnicas de biología molecular,  estas últimas permiten entre otras cosas   hacer un seguimiento morfofilogenético de los virus, gracias a los cuales se puede demostrar si un virus  aislado en el laboratorio, es vacunal o no.


Imagen No. 4 Laringotraqueitis viral. En el centro de la fotografía de observa dos células sincitiales donde es posible observar cuerpos de inclusión intranucleares eosinofílicos (Hematoxilina-Eosina 100x); estos sincitios están en el borde del epitelio traqueal y probablemente están en proceso de  "envejecimiento" y desaparición lo cual sucede cuando han transcurrido varios días después de iniciada la infección, es decir en los estadios crónicos de la misma.

Este caso corresponde a pollos de engorde de 24 días de edad, de  una granja en la que se encastaron 160.000 aves de las cuales enfermaron 50.032 y  habían muerto 3.481 cuando se recurrió al laboratorio para obtener un diagnóstico. En este casos se observaron sincitios conteniendo cuerpos intranucleares de inclusión en: laringe: 2/5; párpado: 5/10.

Pero la histopatología sigue siendo una metodología  diagnóstica de primera mano y que no ha perdido actualidad. Y quienes utilizan esta metodología diagnóstica, tanto histopatológos como los Médicos Veterinarios de campo remitentes de las muestras, están ocurriendo en la falla en el número y tipo de muestras utilizadas.
Nuestra experiencia  en análisis histopatológicos, demuestra que si se quieren encontrar los cuerpos intranucleares de inclusión de la laringotraqueitis viral se deben remitir al laboratorio de histopatología, muestras de al menos 5 párpados, 5 traqueolaringes y cinco pulmones; estos últimos deben incluir el área del hilio del órgano, de tal manera que incluya los bronquios intrapulmonares.


Imagen No. 5 Laringotraqueitis viral  Esta fotografía en la que se observa un sincitio conteniendo cuerpos intranucleares de inclusión, se obtuvo de exudado purulento contenido en el  lumen traqueal de un pollo de 37 días de edad procedente de una granja en la que se presentó la infección con el virus de laringotraqueitis (Hematoxilian-Eosina 100X).

En la granja había 36.700 aves y cuando se reportó el problema y se hicieron los análisis de laboratorio habían muerto 9.486 pollos. Los sincitios conteniendo cuerpos intranucleares de inclusión se  observaron en: tráquea: 4/5;  párpado: 5/5 y mucosa bronquial: 1/5.
Nuestra experiencia en el laboratorio, tomando cinco muestras de párpado, de laringe, de tráquea y de pulmón,  nos dice que la presencia de cuerpos intranucleares de inclusión no se presentan al tiempo en los órganos y tejidos  mencionados. Se pueden presentar las siguientes situaciones respecto de la presencia de cuerpos intranucleares de inclusión:
  • Encontrarse solo en la conjuntiva palpebral.
  • Encontrarse solo en la mucosa de laringe.
  • Encontrarse solo en la mucosa traqueal.
  • Encontrarse solo en la mucosa bronquial.
  • Encontrarse  en uno de los órganos  mencionados arriba y  en uno o varios  de los demás órganos en diferentes combinaciones de frecuencia.
  • Varias combinaciones de la frecuencia de presentación.
Imagen No. 6  Laringotraqueitis viral.  En la fotografía se pueden observan sincitios en proceso de desprendimiento de la mucosa de un bronquio, dentro de los cuales se observan además cuerpos intranucleares de inclusión (hematoxilina-Eosina 100X). Se trata de un caso de laringotraqueitis viral en pollitas de 13 semanas de edad de una granja de levante para ponedoras comerciales.  Se observaron cuerpos intranucleares de inclusión en:  tráquea: 4/5;  mucosa bronquial: 2/5 y párpado: 2/5.

Durante este artículo se hace énfasis en la importancia de tomar muestras de párpado, tráquea, laringe y pulmón (Fragmento que contenga bronquios) debido a que la frecuencia de presentación de la lesión por la cual se elabora el diagnóstico, no es uniforme en todos los órganos citados; se trata de cubrir al máximo la posibilidad de detectar el estado infeccioso mediante la evaluación  histopatológica.

Tabla No. 1 Laringotraqueitis viral.  Esta es una tabla de frecuencias de presentación de  cuerpos intranucleares de inclusión (Solos o en sincitios) en muestras de párpado, laringe, tráquea y bronquios, en 25 casos, en aves comerciales de diferentes estados productivos. Se puede observar que aunque  en casa caso se trata de laringotraqueitis, la  frecuencia es diferente según el órgano. De esta forma no hay que sesgarse en la  toma de la muestra, así se observen lesiones macroscópicas que indiquen que un órgano está afectado o más afectado que otros.

Así que mientras no se remitan cortes de  al menos cinco muestras de: párpado, laringe, tráquea y pulmón (del  área del  hilo, que incluya bronquios intrapulmonares), podemos estar  subdiagnosticando la  enfermedad. Esto es 100% válido en caso de que no se utilicen otras metodologías de laboratorio.


Imagen No. 7  Laringotraqueitis viral.  En esta fotografía se señala (Dentro del epitelio traqueal, una serie de cuerpos de inclusión intranucleares de laringotraqueitis viral en células individuales las cuales por estar infectadas muy seguramente están en un proceso de formación de un sicitio. Esto es frecuente cuando se examinan detenidamente al microscopio  las mucosas de los órganos infectados. La información contenida en la mayoría de artículos sobre laringotraqueitis viral dicen que hay que observar sincitios, lo cual no es completamente cierto. Este es un caso en el que se observaron sincitios conteniendo cuerpos intranucleares de inclusión pero igualmente células  que aún se encuentran dentro de la mucosa, más específicamente dentro del epitelio y en las cuales se pueden observar los cuerpos de inclusión.

La fotografía corresponde a un caso de laringotraqueitis en pollos de engorde  de 39 días de edad, de una granja con 180.000 aves en la cual habían enfermado 85.000 y de  5 aves remitidas para diagnóstico en el laboratorio, se encontraron cuerpos de inclusión en: tráquea: 1/5; párpado: 9/10; epitelio bronquial: 1/5.

Una revisión de  compendios de literatura, de publicación de trabajos técnicos e inclusive en la página  de la OIE, indica que  no todos los técnicos y/o entidades lo están haciendo  de una manera uniforme.
Comienzo por analizar el Manual la de la OIE Sobre Animales Terrestres 2008, capítulo 2. 3.3, dice en el inciso f): “Las tráqueas a utilizar en el examen histopatológico deben colocarse en formol salino y envolverse en parafina inmediatamente después de ser extraídas de las aves. A veces se examinan los párpados y el pulmón”.


Imagen No. 8  En la fotografía de la izquierda se observan varias células sincitiales en proceso de desprendimiento de la mucosa de  la laringe (Hematoxilina-Eosina, 100X). En la fotografía de la derecha se observa una célula sincitial; en las células  sincitiales  que se muestran en las dos fotografías, se pueden observar cuerpos intranucleares de inclusión eosinofílicos.

El caso corresponde a pollitas de levante para ponedoras comerciales, de  10 semanas de edad, de una granja con 222.800 aves de las cuales habían enfermado 57.600. En este caso se detectaron los sincitios con los cuerpos intranucleares de inclusión en: tráquea: 3/6; laringe: 5/6; párpado: 1/6


Estas omisiones existen aún en uno de los más renombrados libros de patología aviar: Diseases of Poultry. En la sexta edición (1972),  en lo referente a laringotraqueitis aviar dice que las lesiones macroscópicas se encuentran principalmente en la tráquea y la laringe.  En la edición de 1994, editada por el doctor B.W. Calnek a la cabeza del grupo, dice exactamente lo mismo que la edición de 22 años atrás. No he visto las ediciones más recientes.
En la revista Avicultura (http://www.aves.pe2.us/2009/08/diagnostico-de-la-laringotraqueitis.html) dice, hablando de la laringotraqueitis viral en aves: "La histopatología continúa siendo utilizada como técnica rápida de diagnóstico, y se fundamenta en la observación de sincitios en el epitelio traqueal". No menciona los otros órganos aparte de la tráquea.

Imagen No. 9 Laringotraqueitis viral. Corte histológico de mucosa bronquial de gallinas de 57 semanas de edad, coloreado con Hematolina-Eosina (40x y 100X respectivamente). En la ampliación del recuadro, se observa un grupo de células conteniendo cuerpos intranucleares de inclusión; corresponde a un sincitio cuyos bordes  o límites  no se encuentran bien definidos, pero que definitivamente está dentro de la mucosa del bronquio.

La granja de  donde  fueron remitidas las aves para diagnóstico por el laboratorio, tiene 17.000 aves. No hay reporte de cuantas enfermaron. En las siete aves  remitidas y de las cuales se tomaron diferentes órganos para evaluación histopatológica, se encontraron sincitios con cuerpos intranucleares de inclusión en:  tráquea: 1/7, laringe. 4/7; mucosa bronquial:  3/7 y párpado: 3/7
En la página web CuencaRural.com, aparece una publicación en donde el autor, el doctor Guillermo Zabala, reconocido virólogo de la Universidad de Georgia, hace referencia al diagnóstico de la laringotraqueitis viral aviar en los siguientes términos:

“El examen microscópico de tejidos sospechosos es muy sencillo, rápido, económico, sensible y fácil de interpretar. Es fundamental obtener para este propósito muestras de párpados, laringes y tráqueas de aves con laringotraqueitis severa pero no crónica o con exceso de exudado fibrinopurulento. La correlación de los resultados de histopatología con los de inmunofluorescencia o detección molecular es muy alta (más del 90%), y por ello debe considerarse como la primera opción.

 Las lesiones microscópicas son patognomónicas e incluyen la formación de sincitios y la presencia de corpúsculos de inclusión intranucleares Cowdry tipo A” 

El doctor Zabala, no menciona los bronquios intrapulmonares, los que siendo continuidad de la tráquea, pueden contener  sincitios que pueden presentar cuerpos intranucleares de inclusión en forma independiente; es decir los puede haber en el bronquio y en la tráquea no. Hago referencia a los cuerpos de inclusión que se encuentran en los sincitios derivados del epitelio bronquial, no en los sincitios que se encuentran en el exudado purulento y/o sanguinolento que  pueden venir de las vías aéreas superiores a los bronquios.

Imagen No. 10 Laringotraqueitis viral. Las dos fotografías (Hemamtoxilina-Eosina, 40X y 100X respectivamente)   fueron tomadas tomadas de  la conjuntiva palpebral de un pollo de engorde de 50 días de edad, proveniente de una granja con 67.000 pollos de los cuales enfermaron todos, con síntomas de blefaroconjuntivitis y ruidos respiratorios.

De muestras de cinco aves remitidas al laboratorio de diagnóstico, se  observaron sincitios contendiendo cuerpos de inclusión intranucleares  únicamente en párpado: 5/5.
El doctor Rafael Campos,  (http://www.nanta.es/pdf/revista5/laringotraqueitis.pdf) señala que, hablando de laringotraqueitis viral: “En histopatología encontramos como lesión patognomónica la presencia de cuerpos de inclusión intranucleares en las células del epitelio traqueal”.  No menciona los párpados, la laringe ni los bronquios  intrapulmonares.

De la misma manera encontramos una ficha técnica en la SAG del Ministerio de Agricultura del Gobierno de Chile, sobre laringotraqueitis viral Diagnóstico de Laboratorio. Muestra a colectar: "tórula traqueal, tráquea. Pruebas de laboratorio: identificación del agente: Aislamiento viral, microscipía electrónica, inmunofluorescencia, IDAG, ELISA, histopatología, métodos moleculares. (www.sag.cl/OpenDocs/asp/pagVerRegistro.asp?argInstanciaId=49...)
Menciona solo  muestras de tráquea, lo que es válido si se va a efectuar el aislamiento e identificación del virus, pero no si se va a hacer histopatología únicamente.


Imagen No. 11 Laringotraqueitis viral. Hacia la derecha de la fotografía se puede observar una célula sincitial conteniendo cuerpos intranucleares de inclusión (Hematoxilina-Eosina, 100X). La célula  sincitial se encuentra en el exudado purulento  en el lumen traqueal.

El diagnóstico de laringotraqueitis viral se hizo en una muestra de nueve aves ponedoras de 24 semanas de edad que procedían de una granja con  65.000 de las cuales enfermaron 30.000 con los siguientes síntomas: blefaritis bilateral con presencia de material espumoso en el canto interno del ojo,  en algunas aves se observa  inflamación hemorrágica de los párpados, se observó igualmente inflamación facial.

De las muestras evaluadas por histopatología, se encontró la siguiente frecuencia de presentación de células sincitiales conteniendo cuerpos intranucleares de inclusión: tráquea: 4/9;  laringe: 2/9, párpado: 1/9

El doctor Enrique Angulo, Asesor Técnico de la División de Aves de  Laboratorios Virbac México S.A. de C.V menciona  en una publicación en internet “Histopatología: Observación de los corpúsculos de inclusión intranucleares en tejidos traqueales y de conjuntiva.  Tinciones con Giemsa, hematoxilina y eosina”. No menciona la laringe en forma independiente ni tampoco los bronquios intrapulmonares.

El criadero El Libertador de Quito Ecuador,  tiene una publicación en internet (http://www.criaderolibertador.com.ec/), en la cual el 27 de abril de 2010, refiriéndose a la laringotraqueitis aviar dice: “Laboratorio: histopatología: cuerpos de inclusión en epitelio respiratorio y conjuntiva (Patognomónico). Preferible observar la evolución de lesiones sobre varios animales”

El término epitelio respiratorio debe referirse seguramente a la traqueolaringe y los bronquios intrapulmonares.

El SENASA, realizó el 17 de septiembre de 2009. El  “I Seminarios internacional de Laringotraqueitis aviar en la ciudad de Lima". En una de las conferencias se menciona la histopatología como uno de los métodos  de diagnóstico, además del aislamiento viral, la serología y las técnicas de biología molecuar. En los órganos a enviar para histopatología menciona; laringe, tráquea, conjuntiva y párpado. (No menciona los bronquios intrapulmonares).

El 22 de diciembre de 2009, el doctor Carlos Vásquez, asesor avícola del Perú publica en la página de Ergomix, un artículo sobre laringotraqueitis aviar, dice  que “La histopatología es una herramienta rápida, económica y es indicado hacerlo cuando las aves al inicio é incluso durante la fase aguda de la enfermedad, a continuación se presenta una diapositiva con los cortes histológicos y las lesiones correspondientes”. En la publicación  no dice cuáles órganos se envían ni a cuáles órganos corresponden las fotos.
(http://www.engormix.com/MA-avicultura/sanidad/articulos/laringotraqueitis-aviar-t2776/165-p0.htm)


Imagen No. 12 Laringotraqueitis viral. En la fotografía se observa una célula sincitial (Hematoxilina-Eosina 100X) en la cual es posible cuerpos intranucleares de inclusión; la fotografía se obsetuvo a partir de un preparado histológico de tráquea.

Este caso  corresponde a gallinas reproductoras de una granja con 32.800 aves de las cuales enfermaron 100; el Médico Veterinario remitente informa que igualmente murieron 100 aves. Se informa en el protocolo de muestras, que las aves afectadas presentan disminución del consumo de alimento, ruidos respiratorios se secreción  nasal serosa. Informa igualmente que en necropsias  en granja se observó traqueitis catarral.
Se enviaron cuatro aves al laboratorio de diagnóstico donde se procedió a hacer la necropsia y a tomas las muestras para diferentes análisis. En la evaluación histopatológica se encontraron  células sincitiales conteniendo cuerpos intranucleares de inclusión en:  mucosa traqueal: 2/4, conjuntiva palpebral: 1/4;  como dato curioso: se observaron cuerpos intranucleares de inclsuión en células de ls glándulas mucosas en el esófago.

Existen revisiones de literatura  respecto de la laringotraqueitis  viral. La doctora Magali Salas Martínez de la Universidad Mayor de San Marcos en Lima en el Sistema de Revisiones en Investigación Veterinaria,  en el Postgrado en Investigación II, tiene un revisión sobre la laringotraqueitis viral cuyo aparte sobre el diagnóstico histopatológico dice “ Es fundamental obtener para este propósito muestras de conjuntiva, laringe y tráquea de aves”. No menciona los bronquios intrapulmonares.

El Médico Veterinario Zootecnista José Alexis Santander en el curso de especialización en Avicultura en la Universidad del Tolima, escribió un “Manual atención de focos Laringotraqueitis Viral Infecciosa”,  en la revisión sobre la enfermedad menciona “Las lesiones microscópicas  son características e incluyen la formación de sincitios y la presencia de  corpúsculos de inclusión intranucleares Cowdry tipo A en células individuales o en los núcleos de células sincitiales características en el epitelio de la conjuntiva, tráquea y/o epitelio bronquial, especialmente en la unión de los  sacos aéreos. Se basó según la referencia  citada por  él mismo en un publicación de Fletcher, 2008. No especifica  en este aparte, a la laringe en forma individual.

Mas adelante  en referencia al diagnóstico histopatológico de la enfermedad dice: “Histopatología: De animales con signos compatible y con período de enfermedad inferior a 5 días, se toman (5) cinco tráqueas, (5) cinco laringes, (5) cinco párpados, (5) hilios pulmonares”.

Debo decir que fui profesor del  doctor José Alexis Santander en cátedra de Patología Aviar en la Especialización en Avicultura de la Universidad del Tolima, en el año 2009. En ese año ya sabíamos la importancia del número y tipo de muestras para el diagnóstico histopatológico de la laringotraqueitis viral aviar.


Imagen No. 13 Laringotraqueitis viral. Hacia la parte  derecha de la fotografía (Hematoxilina-Eosina, 100X) se observa una célula sincitial compuesta por células epiteliales dela tráquea las cuales han exfoliado; la célula sincitial que se observa en la fotografía, está atrapada en un"tapón" o una especie de membrana que con frecuencia se ve en  los casos crónicos en la cuales el material exfoliado de la tráquea, se une a otros componentes del exudado como células inflamatorias, detritus celulares, material proteináceo amorfo y en ocasiones colonias de bacterias. Este material (Como en este caso), forma una especia de membrana que se deposita sobre la mucosa lesionada y en ocasiones forma un tapón que  caso obstruye las vías respiratorias.

El caso del que se tomó la fotografía, corresponde  a pollas al final del levante para producción (19 semanas) en una granja con  70.000 aves, de las cuales 9.000 resultaron afectadas y 100 habían muerto cuando se remitieron las aves al laboratorio para examen de necropia y complementarios. En el protocolo se informa que las aves enfermas mostraban depresión,  ruidos respiratorios, posición ortopneica (Estirando el  y el pico), blefaritis con presencia de material espumoso en el angulo interno  del ojo.

Cuatro aves se remitieron al laboratorio para examen de necropsia y complementarios con el siguiente score para células sincitiales conteniendo cuerpos de inclusión:  tráquea: 2/4; laringe: 2/4; epitelio de mucosa bronquial: 1/4

El caso más reciente y  el cual constituye un buen ejemplo de número de muestras a remitir para diagnóstico histopatológico de laringotraqueitis viral aviar ocurrió hace una semana, cuando llegaron de una misma granja dos clases de muestras:

  • Una muestra en solución de formaldehido tomada por el Médico Veterinario remitente: contenía 5 traqueolaringes y  5 párpados.
  • Aves remitidas vivas al laboratorio.  Se tomaron los siguientes órganos: traqueolaringe: 5; párpado: 5;  pulmón: 5
Tabla No. 2  Frecuencia de presentación de lesiones patognomónicas de laringotraqueitis viral aviar; variaciones de acuerdo  como se tome y envíe la muestra.


Comentario adicional:

Visitando los diferentes sitios en internet a que hago referencia en esta artículo, observé que hay muchas fotos, sobretodo macroscópicas copiadas de  unos autores a otros. No se aclara si es con el visto bueno del autor e igualmente no se dan los créditos. Fea costumbre.